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繪制生長(zhǎng)曲線的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

點(diǎn)擊次數(shù):1482 更新時(shí)間:2015-12-31

    細(xì)胞受殺傷性藥物作用以后,可能出現(xiàn)多方面反應(yīng),細(xì)胞的形態(tài)和增殖生長(zhǎng)的變化是晟易于顯現(xiàn)的。檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響情況可用于測(cè)試藥物效應(yīng)的研究。本節(jié)介紹的藥物對(duì)細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)主要包括繪制生長(zhǎng)曲線的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、成集落的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、有絲分裂指數(shù)測(cè)定的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、縮時(shí)電影顯微攝像術(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

一、繪制生長(zhǎng)曲線的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

(一)試驗(yàn)原理

    繪制培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線可計(jì)數(shù)細(xì)胞增長(zhǎng)的數(shù)值,從而直觀地了解細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡的動(dòng)態(tài)變化。常用于檢測(cè)藥物、培養(yǎng)液的成分和血清等對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

(二)材料

1.待檢材料(藥物)。

2.細(xì)胞培養(yǎng)成層的貼壁細(xì)胞。

3.試劑 0.25%溶液、O.02%EDTA溶液、培養(yǎng)基(RPMll640或DMEM)、小牛血清、Hanks液。

4.器材25ml培養(yǎng)瓶、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、微量加樣器、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙。

(三)買驗(yàn)方法

1.配制EDTA細(xì)胞分離液(消化液),將0.25%溶液與等量目0.02%EDTA溶液混合而成。

2.將單層培養(yǎng)的細(xì)胞用細(xì)胞消化液進(jìn)行消化,使之成為lml的細(xì)胞懸液。

3.待檢藥物處理細(xì)胞將待檢藥物稀釋至合適作用濃度,向細(xì)胞懸液中加人一定量稍檢藥物作用8 h以上。

4.用Hanks液稀釋成10ml,取少量置血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)計(jì)數(shù)。將細(xì)胞懸液調(diào)節(jié)成(1~3)×105/ml,分別接種于25ml培養(yǎng)瓶中(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要決定接種瓶數(shù)及每瓶接種的數(shù)量)。

5.每天每組取3瓶計(jì)數(shù),計(jì)算均值,連續(xù)計(jì)數(shù)7d。

(四)結(jié)果與分析

    用對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙,以細(xì)胞濃度為縱坐標(biāo),天數(shù)為橫坐標(biāo),繪制生長(zhǎng)曲線。

(五)注意事項(xiàng)

1.用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn),除不用消化外,其余操作步驟均相同。但需離心收集細(xì)胞,再用Hanks液吹打成細(xì)胞懸液,然后計(jì)數(shù)。

2.在計(jì)數(shù)細(xì)胞期問,一般不更換培養(yǎng)液。若必須更換,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均同樣更換。

3.每天細(xì)胞計(jì)數(shù)均應(yīng)在相同時(shí)間進(jìn)行,以便減少實(shí)驗(yàn)誤差。

4.由于計(jì)數(shù)的誤差和細(xì)胞在操作過程中丟失或死亡等因素的影響,應(yīng)利用進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。除了進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)外,一般應(yīng)再做分裂指數(shù)測(cè)定、成集落實(shí)驗(yàn)等,互相參考。

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