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使用E2定量elisa試劑盒做試驗(yàn)出現(xiàn)結(jié)果很弱的原因

點(diǎn)擊次數(shù):1034 更新時間:2019-03-21

  使用E2定量elisa試劑盒做試驗(yàn)出現(xiàn)結(jié)果很弱的原因
  ELISA試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果,常見有7種原因,其解決方法如下:
  1)可能原因:溫育的時間或者溫度不夠;
  解決方法:校正溫育箱溫度。
  2)可能原因:顯色反應(yīng)時間太短;
  解決方法:校正定時鐘準(zhǔn)確定時。
  3)可能原因:所用配制緩沖液的蒸餾水有問題;
  解決方法:使用新鮮合格的蒸餾水。
  4)可能原因:加入抗體/酶的稀釋液濃度太低;
  解決方法:按照說明書保存E2定量elisa試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密。
  5)可能原因:酶標(biāo)儀濾光片不正確;
  解決方法:檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片。
  6)可能原因:E2定量elisa試劑盒沒有充分平衡;
  解決方法:試劑室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫。
  7)可能原因:不正確的試劑儲存方式;
  解決方法:按照說明書要求保存E2定量elisa試劑盒。
  2、試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差,這是什么原因造成的?
  答:試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差,這是典型的由測定操作引起的問題,常見原因如下:
  a)可能原因:加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致;
  解決方法:校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密。
  重復(fù)某一樣品時,加樣時間盡可能與次接近;
  重復(fù)測定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性;
  樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。
  b)可能原因:加樣過快,孔間發(fā)生污染;
  解決方法:重復(fù)測定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性;加樣不要過快。
  c)可能原因:加錯樣本;
  解決方法:檢查記錄和試劑,是否加錯樣本。
  d)可能原因:加樣本及試劑時,加在孔壁上部非包被區(qū);
  解決方法:加樣槍頭不要貼壁。
  e)可能原因:不同批號E2定量elisa試劑盒中組分混用;
  解決方法:不同批號E2定量elisa試劑盒中組分不可混用。
  f)可能原因:溫育時間、洗板、顯色時間不一致;
  解決方法:檢查時間是否一致。
  g)可能原因:孔內(nèi)污染雜物;
  解決方法:離心樣品,排除雜物。
  h)可能原因:試劑/樣品沒有混勻;
  解決方法:充分混勻樣品和試劑。
  i)可能原因:血清標(biāo)本未*凝固即加入,反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血
  細(xì)胞,易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。
  解決方法:待血清標(biāo)本*凝固后做試驗(yàn)。
  3、試驗(yàn)結(jié)果白板,而且陽性對照不顯色,應(yīng)如何分析和查找原因?
  答:試驗(yàn)結(jié)果白板,而且陽性對照不顯色,常見原因如下:
  a)可能原因:漏加或者誤加試劑;
  解決方法:檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對標(biāo)簽。
  b)可能原因:試劑過期;
  解決方法:使用有效期內(nèi)的產(chǎn)品。
  c)可能原因:洗板液配制中出現(xiàn)問題,如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氮鈉
  等);
  解決方法:使用干凈的器皿,正確配制試劑。
  d)可能原因:溫育的時間或溫度不夠;
  解決方法:校正溫育箱溫度。
  e)可能原因:標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失;
  解決方法:標(biāo)準(zhǔn)品正確保存、溶解和混勻。
  f)可能原因:抗體失活或者丟失;
  解決方法:更換抗體或者提高抗體濃度
  g)可能原因:酶失活或者丟失
  檢查方法:把工作濃度的酶再稀釋20-100倍,取5uL加入50ul的顯色底物,終止后顯色是否能達(dá)到1.0左右,此為酶的粗略估計。
  解決方法:更換酶或者提高酶的濃度。
  h)可能原因:顯色底物失活
  檢查方法:加少量的工作濃度的酶,TMB是否很快顯色。
  解決辦法:更換顯色底物.
  4.試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,這是什么原因造成的?
  答:試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,常見原因如下:
  a)可能原因:洗板不干凈;
  解決方法:充分洗滌,*拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準(zhǔn)確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染。
  b)可能原因:顯色液變質(zhì)或者試劑過期;
  解決方法:檢查E2定量elisa試劑盒有效期。
  c)可能原因:試劑稀釋有誤,如加酶的濃度過高;
  解決方法:請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制;
  d)可能原因:蒸餾水受酶等污染;
  解決方法:使用新鮮蒸餾水;
  e)可能原因:試劑混用;
  解決方法:不同批號試劑勿混用。
  f)可能原因:培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長。 上一篇 葉綠體Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)看似簡單,其實(shí)不然 下一篇 人CYCLIN B1抗體酶聯(lián)免疫分析說明

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